Label Free 定量蛋白组检测

蛋白质非标记定量技术(Label Free)是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。我们采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,Orbitrap Fusion质谱平台,Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,推出基于Label Free的定量蛋白组分析服务技术。

MRM/PRM定量蛋白组检测

脂质是自然界中存在的一大类极易溶解于有机溶剂、在化学成分及结构上非均一的化合物,主要包括脂肪酸及其天然发生的衍生物(如酯或胺),以及与其生物合成和功能相关的化合物。脂质的重要生物功能及其与疾病的关系,加上基因组学、蛋白质组学和代谢组学的发展催生了脂质组学 (Lipidomics)这一新的研究领域。近年来,质谱技术的发展,特别是软电离离子化技术和高分辨质谱技术在脂质分析中的应用,为脂质组学的研究提供了强有力的技术支持。

SILAC/Dimethyl标记定量蛋白组检测

SILAC是细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture, SILAC)的简称。SILAC实验流程是:细胞培养基中加入轻、中或重型稳定同位素标记的必需氨基酸赖氨酸(Lys)和精氨酸(Arg),在细胞生长过程中使新合成的蛋白会带上稳定同位素标签。等量混合各类型蛋白质,酶解后进行质谱分析。通过比较一级质谱图中不带标记/带同位素标记质谱峰型的面积大小进行相对定量,同时二级谱图对肽段进行序列测定从而进行蛋白鉴定。

TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白组检测

iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo Fisher公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用多个(2-10)稳定同位素标签,特异性标记多肽的氨基基团进行串联质谱分析,能够同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量,可用于研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。

SWATH定量蛋白组检测

SWATH(Sequential Window Acquisition of all Theoretical fragment ions)由ETH Zürich的Dr. Ruedi Aebersold团队与AB SCIEX共同研发的一项全新的质谱采集模式技术。SWATH作为一种DIA (Data Independent Acquisition)技术,将整个质谱扫描质量范围分为若干小窗口,依次对每个窗口的所有离子进行碎裂,使其能够对扫描区间内的所有肽段离子进行高速一级MS扫描再进行二级MS/MS分析。因此,SWATH能够对复杂样品中几乎所有可检测的分子进行定量测定。SWATH综合了shotgun proteomics高通量检测的特点与精准定量分析的优势,是真正意义上的全景质谱检测手段MS/MS ALL。

蛋白芯片HuProt™ 检测

HuProt™20K人类蛋白组芯片,芯片上有近2万种全长蛋白质,覆盖81%的人类基因组ORF区。重组蛋白采用酵母表达系统,逐个进行表达与纯化鉴定。在芯片上每个蛋白质均设置技术重复,并设有多种质控点,确保实验体系稳定可靠。 HuProt™20K人类蛋白组芯片通过化学修饰共价结合超过16,152种人类基因编码蛋白和124种小鼠基因编码蛋白质。这些蛋白广泛覆盖受体、转录因子、激酶、胞外基质蛋白、细胞骨架蛋白等30余种蛋白类型,可用于多种生物学功能的创新研究。

抗体芯片检测

固相细胞因子抗体芯片,尤其适用于样本数量较少,但需要进行大量细胞因子筛选和定量检测的研究类型。抗体芯片在化学修饰的固相芯片片基上共价结合高度特异的细胞因子捕获抗体,通过高亲和的配对二抗进行信号放大,以实现对微量细胞因子的有效检测。进一步,利用梯度稀释的标准品检测信号构建标准曲线,通过标准曲线拟合的方式,实现目标样本中多重细胞因子的准确定量检测。按照研究物种和研究领域(如细胞因子,趋化因子,炎症因子等)都可以选择您最匹配的芯片类型和服务。

蛋白质测序-蛋白质N/C端测序

重组蛋白表达纯化产物的分析过程,特别是重组蛋白品的研发和工艺建立过程,需要对蛋白的N端和C端序列进行确认。应用现有的质谱技术平台,开发出以质谱为基础的蛋白N端序列和C端序列测序技术,一次实验可以同时完成蛋白N端序列和C端序列的测定。以质谱为基础的N端测序技术可以实现对N端封闭和PEG化蛋白的序列测定,与Edman测序形成互补。此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达,检测重组蛋白表达过程是否发生断裂,以及重组蛋白N端和C端序列是否发生修饰。

蛋白质测序-Edman降解蛋白质N端测序

表达纯化后的蛋白产物,特别是蛋白品的分析过程中,需要对蛋白的末端进行验证,以保证表达纯化产物的N端和C端序列准确。Edman降解法是蛋白的N端序列分析中非常成熟的方法之一,有着广泛的应用。采用我们的测序系统,可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统,可以测定N端的60-70个氨基酸。先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台可以测出封闭和修饰的蛋白质末端,与Edman降解法形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。

蛋白质测序-蛋白全序列测定

重组蛋白表达纯化产物的分析过程,特别是重组蛋白品或者抗体剂的研发和工艺建立过程,需要对蛋白的全长进行确认。利用现有的高分辨率质谱技术平台开发出以质谱为基础的蛋白全序列技术,实现对所测定靶蛋白序列100%的覆盖。此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达,检测重组蛋白表达过程是否发生断裂。

基于PCR扩增的单克隆抗体测序

尽管杂交瘤细胞能够无限增殖并表达抗体,但是在长时间的细胞增殖和蛋白表达可能导致抗体基因发生突变以致表达的抗体失效。因此,获取杂交瘤细胞单克隆抗体基因序列对于大规模稳定表达单克隆抗体尤为重要。为了更好解决科研用户的需求,推出了基于PCR扩增技术的单克隆抗体基因测序服务。相较于对单克隆抗体氨基酸序列的测序,单克隆抗体基因测序可以提供更准确更可靠的结果,并且能够更为准确地区分亮氨酸/异亮氨酸等在质谱鉴定中较难区分氨基酸。

流式细胞仪多因子检测

随着流式细胞术和固相化技术的普及和基于微球的多指标检测技术的革命式发展,采用流式细胞术同样可以对可溶性蛋白质进行定性和定量分析。与传统ELISA 技术只能检测一个指标相比,流式多因子检测技术能够实现从一份标本中同时检测多种指标,大大提高了科研人员的工作效率以及实现了对稀少珍贵样品的多指标分析。其中代表技术是Luminex和BD CBA (cytometric bead array system, CBA), 以及eBioscience公司旗下的FlowCytomix技术。采用BD公司的CBA技术以及FlowCytomix技术为广大科研人员提供多参数细胞因子或其它可溶性分子检测服务。

N/O-糖基化蛋白检测

糖基化修饰不仅影响蛋白质的空间构想、生物活性、运输和定位,而且在分子识别、细胞通信、信号转导等特定生物过程中发挥着至关重要的作用。 随着蛋白药物的迅速发展,单抗药物迅速发展,作为大分子糖蛋白药物,单抗药物的糖基化修饰对其稳定性、有效性和安全性等各方面均有不同程度的影响,因此对其糖基化修饰进行全面表征具有十分重要的意义。