随着新一代测序技术的发展和成熟,染色质免疫沉淀实验与高通量测序的整合—Chromatin Immunoprecipitation Sequencing(ChIP Sequencing)可在全基因组范围对蛋白结合位点进行高效而准确的筛选与鉴定,同时也为研究的深入开展打下基础。采用特异性抗体对目的蛋白进行免疫沉淀后,分离与其结合的基因组DNA片段,再通过高通量测序与数据分析,在全基因组范围内寻找目的蛋白的DNA结合位点,并且可以基于多个样品进行差异比较。
甲醛处理细胞收集细胞
超声破碎---加入目的蛋白的抗体
与靶蛋白-DNA复合物相互结合
加入ProteinA,
结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,
并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,
除去一些非特异性结合---洗脱,
得到富集的靶蛋白-DNA复合物---解交联,
纯化富集的DNA-片断---PCR分析。