免疫共沉淀测序 | 基因活性调控研究

染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。CHIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。

免疫共沉淀测序的优势

  • 检测范围广:全基因组范围的免疫沉淀与测序分析;
  • 高性价比:基于抗体富集目标区域,有效降低测序数据量;
  • 微量样本:只需5ng(仅针对人类样本)以上免疫沉淀后的DNA,即可进行测序分析

科学方案设计

  • 甲基化图谱
  • 甲基化谱差异分析
  • 甲基化与基因表达关联分析
  • 构建疾病诊断预测模型
  • 甲基化序列结构
  • 甲基化与组蛋白修饰

实验流程

随着新一代测序技术的发展和成熟,染色质免疫沉淀实验与高通量测序的整合—Chromatin Immunoprecipitation Sequencing(ChIP Sequencing)可在全基因组范围对蛋白结合位点进行高效而准确的筛选与鉴定,同时也为研究的深入开展打下基础。采用特异性抗体对目的蛋白进行免疫沉淀后,分离与其结合的基因组DNA片段,再通过高通量测序与数据分析,在全基因组范围内寻找目的蛋白的DNA结合位点,并且可以基于多个样品进行差异比较。 甲醛处理细胞收集细胞 超声破碎---加入目的蛋白的抗体 与靶蛋白-DNA复合物相互结合 加入ProteinA, 结合抗体-靶蛋白-DNA复合物, 并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗, 除去一些非特异性结合---洗脱, 得到富集的靶蛋白-DNA复合物---解交联, 纯化富集的DNA-片断---PCR分析。

测序工作流程

  • 1
    制备您的文库
  • 2
    高效测序
  • 3
    分析和存储数据

我们的优势

拥有标准化操作实验室和高通量测序技术平台,实验周期短,质量可靠。
拥有Illumina HiSeq 2500、MiSeq等多种高通量测序平台。
技术人员经验丰富,可以根据合作伙伴要求提供实验方案、解决实验问题、分析实验结果。
拥有专业的生物信息团队和超算服务器,可为合作伙伴提供全面生物信息分析服务与技术支持。
  • illumina 二代测序平台
  • PacBio单分子三代测序仪
  • nanopore纳米孔测序仪
  • Bionano单分子测序平台-Lrys系统

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