概述

SILAC(Stable-Isotope Labelling by Amino acids in Cell culture)技术,相对于iTRAQ技术,是较早运用到定量蛋白质组学的一种方法。它是通过细胞的寄代培养,将稳定的同位素通过细胞自身的代谢逐渐标记到生物体内,即用含轻、中或重型同位素标记的必需氨基酸(主要是Lys和Arg)培养基培养多组细胞,标记细胞内新合成的蛋白质,一般培养5-6代,细胞中的蛋白质将都被同位素标记。比如A组和B组,A组是在包含正常氨基酸(light)的培养基中,B组的培养基则含有“重型(heavy)”的氨基酸,即稳定同位素标记的氨基酸。

服务优势

实时追踪项目进展,一切动向尽在掌握。
意见直接反馈项目经理,高效解决。
可对在线项目各维度的服务进行评价。

与体外标记技术相比,SILAC优势

  • 体内代谢型标记,更接受真实的生理状态。
  • 标记后混合制备与上样,结果重复性好,可信度高。
  • 灵敏度高,实验所用的蛋白量少。
  • 实验所需的重复少,通常正反标重复即可。
同位素标记和非标记技术比较
同位素标记 非同位素标记
样本标记同位素 样本非标记
样本量限制,ICAT(2),iTRAQ(8) 样本无限制
在大样本过程中,难于跟踪蛋白丰度 易跟踪蛋白风度
多数肽段难于识别 能够识别大多数肽段
难于识别和定量低丰度 能够鉴别低丰度肽段
需提前进行二级质谱蛋白鉴定 可以鉴定差异后再进行二级质谱蛋白鉴定
实验重现性高 实验重现性低

科学方案设计

  • 农林领域
  • 基础医学
  • 生物医药
  • 微生物领域
  • 海洋水产
  • 生物能源

实验流程

SILAC技术实验原理
细胞5-6代后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到蛋白中,取代了原有的氨基酸,这样,两个蛋白之间就存在分子量的改变,而其它化学性质无异。然后将两组细胞等量混合后,提取出蛋白质,经过酶消化,进行LC-MS/MS质谱测定,可得到相关蛋白的定性和定量数据。通过比较质谱图中肽段信号峰的峰面积大小进行相对定量研究。该技术适用于细胞和动物的体内标记,具有系统误差小,定量准确,并且可以进一步寻找具有时效性变化的差异蛋白,更精准地研究刺激的作用机理等技术特点。

我们的优势

拥有标准化操作实验室和高通量测序技术平台,实验周期短,质量可靠。
拥有Illumina HiSeq 2500、MiSeq等多种高通量测序平台。
技术人员经验丰富,可以根据合作伙伴要求提供实验方案、解决实验问题、分析实验结果。
拥有专业的生物信息团队和超算服务器,可为合作伙伴提供全面生物信息分析服务与技术支持。
  • Sciex Triple TOF 5600+
    该系统具有超高快速扫描速度,极高质谱分辨率和定量稳定性
  • Thermo Scientific Q Exactive
    适用于非目标或目标化合物筛选,也实现广泛的定性和定量分析
  • Sciex QTrap 5500
    结合串联四级杆和线性离子阱扫描的超低定量综合分析平台
  • Waters Xevo G2-XS QTOF
    帮助鉴定最具挑战性的复杂样本中的多类化合物               
  • Sciex TOF/TOF 5800
    准确率灵敏度最高的MALDI-TOF-TOF质谱系统,用于众多ICAT,iTRAQ,
    SILAC等差异定量技术

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